MG1655

MG1655 Chemically Competent Cell 產品說明書

產品規格（CAT#: DL2030）

MG1655：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1

產品說明

MG1655菌株來源于W1485，是K12的衍生菌株，是一種經過較少改造，比較接近于“WT-野生型”的大腸桿菌工程菌株。MG1655外觀形態標準，同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用，也可作為蛋白表達的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質粒被降解。pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. MG1655感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15 h。

注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

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