TOP10F`

TOP10F` Chemically Competent Cell 產品說明書

產品規格（CAT#: DL1011）

TOP10F`:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F′{lacI^q Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG 

產品說明

TOP10F`菌株來源于TOP10菌株。將F`{lacIq Tn10 (Tet^R)}因子轉入TOP10菌株，即為TOP10F`。該F`因子攜帶lacI^q 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒性蛋白質粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選（如用于藍白斑篩選，需在培養基中加入IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達）實驗，具有四環素抗性。TOP10F`感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. TOP10F`感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。

注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

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